Vacina de DNA utilizando genes sintéticos derivados do peptídeo SBm7462 contra o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e avaliação da resposta imune em camundongos Balb/c

Abstract

O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um dos mais importantes artrópodes em medicina veterinária devido perdas econômicas e problemas de saúde causados na produção de gado na América Central e do Sul, bem como na Austrália. Como alternativa ao controle químico, a imunização de bovinos com antígeno proteíco Bm86 induz uma resposta imune protetora. Um peptídeo sintético, SBm 7462, derivado da Bm86, tem obtido excelentes resultados no controle de carrapatos. A construção e síntese de uma sequência nucleotidíca baseada neste peptídeo podem ser útil para o desenho de uma vacina de DNA que tem muitas vantagens sob uma vacina sintética. Um gene, denominado seq1, foi construído repetindo três vezes a sequência nucleotidídica do SBm 7462. Ele foi clonado no vetor de expressão em mamíferos, pCIneo, transfectado em células VERO e injetado em camundongos BALB/c. Dois métodos foram usados para análise da expressão do peptídeo in vitro: DOT ELISA e PAP. Em ambos, os resultados demonstraram que a seqüência nucleotídica (seq1) não havia sido expressa em células VERO. In vivo, quando camundongos foram inoculados com o cassete de expressão eles não responderam ao ELISA. Eles elevaram os títulos de anticorpos, apenas, quando inoculados com o peptídeo sintético SBm 7462. Os melhores títulos de imunoglobulinas foram vistos quando o SBm 7462 foi administrado subcutâneamente. Após isso, inserimos uma mutação no início do seq 1, porém, o sequenciamento demonstrou que nenhum códon de iniciação (ATG) tinha sido inserido.

The Rhipicephalus (Boophilus) microplus is one of the most important arthropods in veterinary medicine due economic losses and health problems caused in cattle production, mainly in Central and South America, as well as in Australia. As an alternative to chemical control, immunization of bovines with Bm86 antigen to induce a protective immune response. A synthetic peptide, SBm 7462, derived from Bm86, has been shown great results in control of ticks. The construction and synthesis of one nucleotide sequence based on this peptide might be useful for design a DNA vaccine that has many advances than peptide vaccine. A gene, called seq1, was constructed with a three repetition of nucleotide sequence of SBm 7462. It was cloned into a pCIneo vector expression in mammals, transfected in VERO cells and injected in BALB/c mouse. Two methods were used to analysis of peptide expression in vitro: DOT ELISA and PAP. In both, the results showed that the nucleotide sequence (seq1) had not been express in VERO cells. In vivo, when mice were inoculated with the expression cassette they did not response in ELISA. They elevated antibody titles only when vaccinated with the syntetic peptide SBm 7462. And, the best titles of immunoglobulins were seen when the SBm 7462 was administered subcutaneously. After that, we insert a mutation at the begging of seq1, but, the sequenciament demonstrated that any initiation codon (ATG) had been inserted.