Alendronato de sódio, risedronato sódico, atorvastatina cálcica e lovastatina na reparação de fraturas tibiais em ratas com osteoporose induzida pela dexametasona

Abstract

Este trabalho consistiu de um ensaio biológico com o objetivo de estudar as influências do bifosfonatos alendronato de sódio e risedronato sódico e das estatinas atorvastatina cálcica e lovasatatina na recuperação de fraturas de tíbias de ratas osteoporóticas induzida pelo glicocorticóide dexametasona, em ratas da raça Wistar, adultas, pesando 250 ± 20g. O processo da indução da osteoporose consistiu na administração de dexametasona, na dose de 7,5 mg/kg de peso corporal, por via IM, uma vez por semana, durante quatro semanas, nos seis animais de todos os grupos, à exceção dos animais que constituiu o grupo controle (G1). Os animais do grupo 2 (G2), chamado osteoporótico, receberam apenas dexametasona. Após o período de indução da osteoporose, os animais de todos os grupos foram submetidos ao procedimento de fratura fechada das tíbias esquerdas, realizado por um médico veterinário. Imediatamente após a indução das fraturas, iniciou-se os tratamentos onde o grupo 3 (G3) recebeu alendronato de sódio na dose de 0,25mg/kg; o grupo 4 (G4) recebeu risedrnato de sódio na dose de 1 mg/kg ; o grupo 5 (G5) que recebeu atorvastatina cálcica na dose de 1,2 mg/kg e o grupo 6 (G6) que recebeu lovastatina na dose de 2mg/kg. Todas as substâncias foram administradas por via oral, diariamente. No período de 35dias, após o início dos tratamentos, foram coletados amostras de sangue para dosagens de cálcio, fósforo, albumina e proteínas totais no equipamento multiparamétrico de bioquímica Alizé com kits da marca BioMerieux, e fosfatase alcalina óssea no equipamento de quimioluminescência Access Immunoassay System da Beckman Coulter com kits Ostase. Após o sacrifício, foi coletado a tíbia esquerda de cada animal que, uma vez fixados foram analisados morfometricamente, radiografados, submetidas e processado rotineiramente para obtenção das lâminas, cujos cortes foram corados Tricrômico de Masson, para estudo histologico em microscopia de luz. As tíbias direitas foram também coletadas para realização de testes biomecânicos. Medidas de altura, largura e do calo ósseo das tíbias foram realizadas com auxílio de um paquímetro. Além disso, foram realizados aferições da densidade desses ossos, que ocorreram através da relação dos valores de pesagem e deslocamento de líquido em recipiente graduado. As tíbias esquerdas foram então radiografadas em perfil e a imagem obtida foi submetida a uma analise de densidade radiográfica através do programa Image Tool for Windows 3.0, por tons de cinza obtidos da imagem. As áreas das análises foram delimitadas em todas as imagens radiográficas das tíbias e só foram levadas em consideração para análise as áreas selecionadas.Testes de flexão, nas tíbias direitas foram realizados com o auxílio do aparelho Instrom (Laboratório de Papel e Celulose do Departamento de Engenharia Florestal/UFV). Procedeu-se o cálculo percentual da densidade trabecular óssea, à partir da imagem amostral de osso trabecular, contida na região subcondral, de cada corte histológico, em microscópio óptico equipado com câmara digital (TCL-984 P), analisada em monitor de microcomputador de 14 polegadas, utilizando-se da técnica de histomorfometria de contagem de pontos. O ensaio biológico foi realizado segundo delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos em seis repetições. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste F (p<0,05). Os grupos controles (G1 e G2) foram comparados entre si, por meio do teste F. Os grupos tratados (G3, G4, G5 e G6) foram comparados entre si, através do teste de Tukey à 5% de probabilidade. As comparações também foram realizadas entre os grupos tratados e os controles G1 e G2, sendo que, para o mesmo, foi aplicado o teste de Dunnet à 5% de probabilidade. Os resultados não mostraram diferenças significativas entre o grupo controle (G1) e o grupo osteoporótico (G2), bem como, entre eles e os grupos tratados (G3, G4,G5 e G6) e, também, entre os grupos tratados entre si, em todos os períodos, quanto aos valores sérico de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina óssea. Através da morfometria e histomorfometria foi possível constatar a indução da osteoporose com o glicorticóide, assim como a melhoria na densidade óssea, densidade trabecular óssea e espessura do calo ósseo em todos os grupos tratados prevalecendo o grupo tratado com alendronato de sódio que apresentou melhores resultados. Os resultados radiográficos e biomecânicos corroboram com os resultados histomorfometricos. Os resultados bioquímicos, principalmente fosfatase alcalina óssea, que permaneceram sem diferenças significativas em todos os grupos, quando avaliados em conjunto com a morfometria, histomorfometria, radiografia e teste biomecânicos demonstram que prevaleceram as propriedades antirreabsortivas em relação as formadoras de osso em todos os grupos tratados. Apesar da prevalência das propriedades antirreabsortivas em todos os tratamentos, a morfometria, histomorfométria, radiografia e testes biomecânicos mostrou resultados equiparáveis à recuperação óssea do grupo normal, o que demonstra que os mesmos não interferem negativamente e sim positivamente no processo de recuperação de fraturas em animais osteoporóticos. Ressalva- se, no entanto, que estudos posteriores das dosagens, interações, biodisponibilidades, além dos efeitos toxicológicos dessas substâncias farmacológicas, fazem-se necessários.

This work consisted of a biological test with the objective to study the influences of the bifosfonates alendronate of sodium and sodic risedronate and of the statins calcic atorvastatine and lovasatatine in the recuperation of fractures of shin-bones of osteoporotics rats induced by the dexamethasone, in rats of the race Wistar, adults, weighing 250 ± 20g. The process of the induction of the osteoporosis consisted of the administration of dexamethasone, of the dosis of 7,5 mg / kg of physical weight, for road IM, once weekly, during four weeks, of six animals of all the groups, with the exception of the animals that there appointed the control group (G1). The animals of the group 2 (G2), called osteoporotics, received only dexamethasone. After the period of induction of the osteoporosis, the animals of all the groups were subjected to the proceeding of shut fracture of the leftt shin-bones, carried out by a veterinary doctor. Immediately after the induction of the fractures, one began the treatments where the group 3 (G3) received alendronate of sodium in the dosis of 0,25mg/kg; the group 4 (G4) received risedronate of sodium in the dosis of 1 mg / kg; the group 5 (G5) that received calcic atorvastatine in the dosis of 1,2 mg / kg and the group 6 (G6) what it received lovastatine in the dosis of 2mg/kg. All the substances were administered by oral road, daily. In the period of 35 days, after the beginning of the treatments, samples of blood were collected for dosages of calcium, phosphorus, albumin and total proteins in the multiparametric equipment of biochemistry Alizé with kits of the mark BioMerieux, and phosphatase alkaline bone in the equipment of quimioluminescence Access Immunoassay System of Beckman Coulter with kits Ostase. After the sacrifice, there was collected the left shin-bone of each animal what, once fixed they were morfometric analysed, X- rayed and when it was prosecuted for getting the blades, which parliament Masson Tricrômic was colored, for hitological study in light microscopie. The right shin-bone was collected to subject to biomechanical tests. All s measures of height, width and of the bone callus of the shin-bones they were carried out with help of a paquimeter. Besides, there were carried out gauging of the density of these bones, which took place through the relation of the values of weighing and dislocation of liquid in graduated container. The left shin- bones were X-rayed then in profile and the obtained image was subjected to an analysis of radiografic density through the program Image Tool he will be Windows 3.0, for tones of ash obtained of the image. The areas of the analyses were delimited in all the radiografic images of the shin-bones and only the selected areas were taken into account for analysis. Tests of flexing, in the right shin-bones they were carried out with the help of the appliance Instrom (Laboratory of Paper and Cellulose of the Department of Engineering Florestal/UFV). One proceeded the percentage calculation of the density trabecular bone, from the image amostral of trabecular bone, contained in the region subcondral, of each histological cut, in optical microscope equipped with digital camera (TCL-984 P), analysed in monitor of microcomputer of 14 inches, making use of the technique of histomorfometric of counting of points. The biological test was carried out according to delineation completely casualizado, with six treatments in six repetitions. The obtained results were subjected to the variance analysis and to the test F (p <0,05). Control the groups (G1 and G2) they were compared between you, through the test F. The treated groups (G3, G4, G5 and G6) were compared between you, through the test of Tukey to 5% of probability. The comparisons also were carried out between the treated groups and the controls G1 and G2, being that, for the same thing, the test of Dunnet was applied to 5 % of probability. The results did not show significant differences between the group control (G1) and the osteoporotic group (G2), as well as, between them and the treated groups (G3, G4, G5 and G6) and, also, between the groups treated between you, in all the periods, as for the values silken of calcium, phophorus and phosphatase alkaline bone. Through the morfometric and histomorfometric was possible the induction of the osteoporose noted with the glucorticoid, as well as the improvement in the bone density, density trabecular bone and thickness of the bone callus in all the treated groups when the group is prevailing treated with alendronate of sodium that presented better results. The results radiografics and biomechanical tests corroborate with the histomorfometric results. The biochemical results, principally phosphatase alkaline bone, what remained without significant differences in all the groups, when valued together with the morfometric, histomorfometri, radiografic and biomechanical test demonstrate what prevailed the properties antirreabsortives in relation the forming ones of bone in all the treated groups. In spite of the predominance of the properties antirreabsortives in all the treatments, the morfometric, histomorfometric, X-ray and biomechanical tests showed comparable results to the bone recuperation of the normal group, which demonstrates what same do not interfere negatively and which positively in the process of recuperation of fractures in osteoporotics animals. Is excepted, however, which subsequent studies of the dosages, interactions, biodisponibility, besides the toxicological effects of these pharmacological substances, make to themselves necessary.