DNA sizing, composition and origin of induced micronuclei of Zea mays L.

Abstract

Micronuclei (MN) are constituted of chromatin, which originated from DNA damages induced by mutagens. The mutagens promote a clastogenic effect characterized by chromosome structure damage, and/or an aneugenic effect with the loss of a whole chromosome. Due to their origin, MN are distinct in relation to genomic origin and composition. In plant mutagenesis, centromeric, telomeric and rDNA sequences were identified in MN composition. We aimed to investigate the DNA sizing, composition and origin of induced Zea mays MN after methyl methanesulfonate (MMS) treatment. Using image cytometry, we showed that the MN have distinct DNA sizing, predominantly between 0.5 – 1.5 pg. These values indicated that the MN were generated from different chromosome fragments. The variability of MN composition was confirmed by fluorescence signal variation of 180-bp knob and Grande LTR-retrotransposon sequences. Therefore, these sequences, especially the Grande LTR-retrotransposon sequence that is rich in guanine, can be considered hotspots of MMS damage and, consequently, for MN formation. The different MN origins were also revealed by a probe pool produced from two individual microdissected MN. Each microdissected MN was originated from different chromosome fragments consisting of DNA sequences of all Z. mays chromosomes. Altogether, our results showed the variability of Z. mays MN from several chromosome fragments formed after MMS treatment. Therefore, our findings demonstrated the extent of the genotoxic damage promoted by MMS in Z. mays genome. We provided insights concerning the structure of MN and methodologies that can be employed in plant mutagenesis research. Keywords: Mutagenesis. Maize. DNA content. Microdissection. Repetitive DNA sequences.

Os micronúcleos (MN) são constituídos por cromatina, que se originam de danos ao DNA induzidos por agentes mutagênicos. Os agentes mutagênicos promovem um efeito clastogênico caracterizado por danos à estrutura cromossômica e/ou um efeito aneugênico com a perda de um cromossomo inteiro. Devido à sua origem, os MN são distintos em relação à origem genômica e composição. Na mutagênese vegetal, sequências centroméricas, teloméricas e de rDNA foram identificadas na composição de MN. Nosso objetivo foi investigar o tamanho do DNA, composição e origem de MN induzidos de Zea mays após o tratamento com metanossulfonato de metila (MMS). Usando citometria de imagem, mostramos que os MN possuem tamanhos de DNA distintos, predominantemente entre 0,5 - 1,5 pg. Esses valores indicaram que os MN foram gerados a partir de fragmentos cromossômicos diferentes. A variabilidade da composição dos MN foi confirmada pela variação do sinal de fluorescência das sequências knob 180-bp e do retrotransposon-LTR Grande. Portanto, essas sequências, principalmente a sequência retrotransposon- LTR Grande rica em guanina, podem ser consideradas hotspots de danos por MMS e, consequentemente, de formação de MN. As diferentes origens dos MN também foram reveladas por um pool de sondas produzido a partir de dois MN individuais micromanipulados. Cada MN micromanipulado foi originado de diferentes fragmentos de cromossomos que consistem em sequências de DNA de todos os cromossomos de Z. mays. No geral, nossos resultados mostraram a variabilidade de MN de Z. mays a partir de vários fragmentos de cromossomos formados após o tratamento com MMS. Portanto, nossos resultados demonstraram a extensão do dano genotóxico promovido por MMS no genoma de Z. mays. Fornecemos insights sobre a estrutura dos MN e metodologias que podem ser empregadas na pesquisa de mutagênese vegetal. Palavras-chave: Mutagênese. Milho. Conteúdo de DNA. Micromanipulação. Sequências repetitivas de DNA.