Avaliação da técnica de ATP-bioluminescência no controle do procedimento de higienização na indústria de laticínios

Abstract

Foram avaliadas pela técnica de ATP-bioluminescência i) a qualidade microbiológica da água do manancial de captação para tratamento na ETA/UFV, da água de resfriamento de amônia e da água industrial de uso em um laticínio, ii) a adesão de Escherichia coli K12 e de esporos de Bacillus sporothermodurans, em suspensões, contendo cerca de 10 4 e 10 6 UFC/mL, em aço inoxidável e em polietileno de baixa densidade a 37°C e tempo de adesão de 24h. e, iii) o procedimento de higienização em superfícies de caminhão tanque, tanque de resfriamento de leite cru, tanque de equilíbrio do pasteurizador, desnatadeira, tanque de armazenamento de leite pasteurizado e tanque de equilíbrio para empacotamento de leite pasteurizado. Nas águas foram efetuadas, também, as contagens de mesófilos aeróbios, expressos em UFC/mL e coliformes totais, expressos em NMP/100mL. Nas superfícies foram determinados os números de mesófilos aeróbios aderidos, expressos em UFC/cm 2 . Foi utilizado o luminômetro UNILITEX-cel (BIOTRACE), para os testes de determinação de ATP, expressos em Unidades Relativas de Luz (URL), incluindo ATP total e livre. Em relação à água industrial, houve a concordância entre os métodos de bioluminescência e de contagem de mesófilos aeróbios e coliformes totais. As amostras de água de manancial e de resfriamento não apresentaram diferença (p<0,05), pelo teste de Tukey, para as quantidades de ATP total, livre e também para as contagens microbianas. Constataram-se concentrações de ATP microbiano diferentes para essas amostras de água. Os resultados indicam que teste de ATP total é mais recomendado e sugerem que qualidade físico-química da água diminui a medida de luz. A bioluminescência não foi apropriada para avaliar a presença de esporos de B. sporothermodurans e de E. coli nas superfícies avaliadas. A determinação das URL foi afetada pelas condições de adesão da E. coli. Os resultados mostram que tanto a concentração de ATP total e a contagem de mesófilos aeróbios foram diferentes (p<0,05) quando se comparou antes - 9772 URL e 1,20 X10 3 UFC/cm 2 - e após - 2511 URL e 1,10x10 1 UFC/cm 2 - o procedimento de higienização. A bioluminescência considerou 100% das superfícies em condições higiênicas insatisfatórias e contagem em placas apenas detectou 50%, considerando a recomendação da APHA e 28% a recomendação da OMS. Não houve concordância entre bioluminescência e a contagem microbiana na classificação quanto às condições higiênicas das diferentes superfícies. Observou-se grande variação na leitura de URL, sugerindo a necessidade de se efetuar mais de uma análise na superfície avaliada. A técnica de ATP-bioluminescência pode ser usada como indicadora das boas condições de limpeza, não apresentando relação com a contagem microbiana, indicando também a possibilidade de adesão microbiana e formação de biofilmes.

ATP-bioluminescence techniques were used to evaluate i) the microbiological quality of the ETA/UFV, treatment water, ammonia-cooling water and industrial water at a dairy, ii) the adhesion of Escherichia coli K12 and Bacillus sporothermodurans spores, in suspensions containing around 10 4 to 10 6 UFC/mL on stainless steel, at 37oC and adhesion time of 24 h and, iii) hygiene monitoring of truck surfaces, raw milk cooling tanks, pasteurizering tanks, milk centrifuge, pausterized milk storing tank and pausterized milk packaging tank. Aerobic mesophyllic and total coliform countings were also conducted in the water samples, respectively, expressed as UFC/mL and NMP/100 mL. The numbers of Aerobic mesophylls, expressed in UFC/cm 2 were determined on the surfaces. The UNILITEX-cel (Biotrace) luminometer was used for determining ATP, expressed as Relative Units of Light (RUL), including total and free ATP. For industrial water, there was an agreement between the bioluminescence and the counting methods of aerobic mesophylls and total coliforms Treatment and cooling water samples did not present any difference (p > 0.05) by the Tukey test for total and free ATP amounts nor for the microbial countings. Different microbial ATP concentrations were found for these water samples. The results indicate that the total ATP test is more adequate, suggesting that the physical chemical quality of water decreases light measurement. Bioluminescence was not appropriate to evaluate the presence of B. sporothermodurans and E. coli spores on the surfaces evaluated. RUL determination was affected by E. coli adhesion conditions. The results show that both total ATP and aerobic mesophyll countings were different (p < 0.05) when hygiene monitoring was compared before - 9772 RUL and 1.20 x 10 3 UFC/cm 2 - and after - 2511 RUL and 1.10 x 10 1 UFC/cm 2 . Biolominescence considered 100% of the surfaces to be under inadequate hygiene conditions while plate counting detected only 50%, based on APHA recommendation and 28%, based on WHO recommendation. There was no agreement between bioluminescence and microbial counting for hygiene condition classification under different surfaces. A great variation in RUL reading was observed, suggesting the need to carry out more than just one analysis on the surface evaluated.