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Tipo: Dissertação
Título: Efeito da diluição pós-descongelamento sobre a viabilidade espermática de sêmen congelado de jumentos da raça Pêga
Efect of post-thaw diluition on sperma viability of frozen sêmen of Pêga donkeys
Autor(es): Figueira, Maria Eduarda Borges
Abstract: A criopreservação, apesar de apresentar vantagens, ainda possui limitações devido aos danos causados aos espermatozoides, sendo não só pela técnica de resfriamento como também pelo uso do glicerol. O glicerol é o crioprotetor mais utilizado em diluentes para congelamento e, apesar de proteger a célula contra a formação de cristais de gelo intracelulares, causa danos diretos e indiretos às células espermáticas. Também existe a hipótese de que o endométrio de jumentas seja sensível ao glicerol, sendo sua presença no sêmen descongelado um fator que diminui as chances da inseminação artificial ser bem-sucedida. A diluição pós-descongelamento é uma técnica que tem como objetivo diminuir os efeitos deletérios do glicerol sobre os espermatozoides e sobre o endométrio das jumentas, fazendo com que o crioprotetor seja diluído e/ou retirado dos espermatozoides. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da diluição pós- descongelamento de sêmen de asininos sobre a viabilidade espermática in vitro. Foram utilizados vinte e cinco ejaculados de cinco jumentos, os quais foram divididos em 4 tratamentos: controle: sem diluição pós-descongelamento; BS: diluição pós-descongelamento com diluente comercial à base de leite em pó BotuSêmen®; PS: diluição pós-descongelamento com plasma seminal; e BS+PS: diluição pós-descongelamento com diluente comercial à base de leite em pó BotuSêmen® + plasma seminal. A avaliação da cinética espermática foi realizada por meio do Computer Assisted Sperm Analyser (CASA) onde foram avaliados os seguintes parâmetros: MOT (motilidade total, %), PMOT (motilidade progressiva, %), VAP (velocidade de trajeto, μm/s), VSL (velocidade progressiva, μm/s), VCL (velocidade curvilinear, μm/s), ALH (amplitude de deslocamento lateral da cabeça, μm), BCF (frequência de batimentos flagelares, Hz), STR (retilinearidade, %), LIN (linearidade, %). O sêmen descongelado também foi submetido a avaliação pelo citômetro de fluxo por meio da utilização de sondas fluorescentes onde foram avaliados: integridade de membrana plasmática e acrossomal (FITC-PSA/IP), produção de peróxio de hidrogênio intracelular (DCFDA) e potencial de membrana mitocondrial (JC-1). Os resultados para cinética espermática mostraram que os parâmetros MOT, PMOT, LIN e STR não diferiram entre as amostras dos tratamentos (P>0,05). Os parâmetros de VCL, VSL, VAP foram maiores (P<0,05) em BS (53,0 ± 3,1, 41,8 ± 2,7, 45,8 ± 2,8, respectivamente) do que para as amostras do grupo controle (46,4 ± 2,3, 37,3 ± 1,8, 41,1 ± 2,0, respectivamente). As variáveis ALH e BCF foram maiores (P<0,05) nos grupos BS e BS+PS (2,2 ± 0,1 e 2,1 ± 0,1, respectivamente para ALH; 9,5 ± 0,2 e 9,3 ± 0,2 respectivamente para BCF) em relação aos grupos controle e PS (1,7 ± 0,1 e 1,8 ± 0,1 respectivamente para ALH; 8,1 ± 0,2 e 8,4 ± 0,1 respectivamente para BCF). Na análise de integridade de membrana plasmática e acrossomal, o grupo controle foi o que apresentou menor P<0,05) número de células com acrossoma e membrana plasmática lesionados (41,85 ± 3,46), seguido pelos grupos PS (51,83 ± 3,00), BS (56,76 ± 3,02) e BS+PS (61,38 ± 3,09). Na avaliação da produção intracelular de peróxido de hidrogênio, o grupo controle foi o que apresentou menor (P<0,05) porcentagem de células mortas com produção de H2O2 (75,28 ± 2,18), seguido pelos grupos BS e PS que não diferiram entre si (77,96 ± 1,40 e 78,99 ± 1,38 respectivamente) e pelo grupo BS+PS (79,07 ± 1,18). Na avaliação de potencial de membrana mitocondrial, o grupo controle apresentou a maior porcentagem de células com bom potencial mitocondrial (41,92 ± 5,79), seguido pelo grupo BS (38,23 ± 5,96) e pelos grupos BS+PS e PS que não diferiram entre si (P>0,05) (36,78 ± 5,39 e 36,32 ± 5,68 respectivamente). A diluição pós-descongelamento preservou as características de motilidade total e progressiva do sêmen descongelado, mas não foi capaz de preservar a integridade de membrana plasmática e acrossomal, o potencial de membrana mitocondrial, assim como não reduziu a produção de peróxido de hidrogênio e seus efeitos sobre os espermatozoides descongelados de jumentos da raça Pêga.
Cryopreservation, although presenting advantages, still has limitations in equidae by causing damages to spermatozoa, being these damages caused not only by the cooling technique but also by glycerol. Glycerol is the most commonly used cryoprotectant in freezing diluents and, while protecting the cell against intracellular ice crystal formation, it causes direct and indirect damage to the sperm cell. It is also hypothesized that the uterus of donkeys is sensitive to glycerol, and its presence in thawed semen is a factor that decreases the chances of successful artificial insemination. The post-thaw dilution is a technique that aims to reduce the deleterious effects of glycerol on the sperm and to the uterus of donkeys, causing the cryoprotectant to be diluted and / or removed from the spermatozoa. The objective of this study was to evaluate the effects of post-thaw dilution on asinine semen on sperm viability in vitro. Twenty-five ejaculates were used from five donkeys, being divided into four treatments: control: without post- thaw dilution; BS: post-thaw dilution with commercial milk-based diluent BotuSêmen®; PS: post-thaw dilution with seminal plasma; and BS + PS: post- thaw dilution with commercial milk-based diluent BotuSêmen® + seminal plasma. The analysis of sperm kinetics was performed using computer assisted sperm analyzer (CASA), MOP (total motility, %), PMOT (progressive motility, %), VAP (trajectory velocity, μm / s), VSL (linear velocity, μm / s), VL (curvilinear velocity, μm / s), ALH (aplitude of lateral head displacement, μm), BCF (beat cross frequency, Hz), STR (straightness, %), LIN (linearity, %). The thawed semen was also submitted to an evaluation by the flow cytometer using fluorescence probes where the following were evaluated: plasma membrane and acrosomal membrane (FITC-PSA), intracellular hydrogen peroxide production (DCFDA) and mitochondrial membrane potential (JC-1). The results for spermatic kinetics showed that the parameters MOT, PMOT, LIN and STR did not differ among treatments (P> 0.05). VCL, VSL and VAP parameters were significantly higher in BS (53.0 ± 3.1, 41.8 ± 2.7, 45.8 ± 2.8, respectively) than in the control group (46.4 ± 2.3, 37.3 ± 1.8, 41.1 ± 2.0, respectively). ALH and BCF variables were significantly higher (P <0.05) in BS and BS + PS groups (2.2 ± 0.1 and 2.1 ± 0.1, respectively for HL, 9.5 ± 0.2 and 9.3 ± 0.2 respectively for BCF) than in the groups control and PS (1.7 ± 0.1 and 1.8 ± 0.1 respectively for ALH, 8.1 ± 0.2 and 8.4 ± 0.1 respectively for BCF). In the analysis of plasma and acrosomal membrane integrity, the control group presented the lowest number of cells with acrosome and plasma membrane lesions (41.85 ± 3.46), followed by PS (51.83 ± 3.00), BS (56.76 ± 3.02) and BS + PS (61.38 ± 3.09). In the evaluation of the intracellular production of hydrogen peroxide, the control group had the lowest percentage of dead cells with H2O2 production (75.28 ± 2.18), followed by BS and PS groups that did not differ (77.96 ± 1.40 and 78.99 ± 1.38 respectively) and by the BS + PS group (79.07 ± 1.18). In the evaluation of mitochondrial membrane potential, the control group had the highest percentage of cells with good mitochondrial membrane potential (41.92 ± 5.79), followed by BS (38.23 ± 5.96) and BS + PS and PS groups, which did not differ statistically (36.78 ± 5.39 and 36.32 ± 5.68, respectively). The post-thaw dilution preserved the total and progressive motility characteristics of the thawed semen but was not able to preserve the plasma and acrosomal membrane integrity, the mitochondrial membrane potential, did not reduce the production of hydrogen peroxide and its effects on the thawed spermatozoa of the Pêga donkeys.
Palavras-chave: Jumento
êmen - Criopreservação
Espermatozóides
Glicerol
CNPq: Reprodução Animal
Editor: Universidade Federal de Viçosa
Titulação: Mestre em Zootecnia
Citação: FIGUEIRA, Maria Eduarda Borges. Efeito da diluição pós-descongelamento sobre a viabilidade espermática de sêmen congelado de jumentos da raça Pêga. 2018. 47 f. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2018.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/24815
Data do documento: 9-Mai-2018
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