Influência do antibiótico cefotaxima na cultura de protoplastos derivados de mesófilo de Passiflora incarnata L.

Abstract

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do antibiótico cefotaxima na cultura de protoplastos derivados de mesófilo de Passiflora incarnata L. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do antibiótico cefotaxima nas eficiências inicial (BIP) e final (EFP) de plaqueamento de protoplastos derivados de mesófilo de Passiflora incamata L. Folhas novas, recém-expandidas, de plantas obtidas a partir da germinação de sementes e anteriormente à emissão das gavinhas, foram utilizadas como fonte de explantes. Os protoplastos foram cultivados a uma densidade de plaqueamento de 1,5 x 105 protoplastos ml-1 em meio KM8p e gotas de agarose “SeaPlaque” (FMC, Rockland, USA) a 0,6% (p/v); as seguintes concentrações de cefotaxima foram adicionadas ao meio: 0, 50, 100, 250, 300 e 400 mg.l-1. A presença do antibiótico no meio foi essencial no incremento das eficiências de plaqueamento de protoplastos de P. incamata. Na análise de regressão foi adotado o modelo quadrático, e, em função dos níveis do antibiótico avaliados, observou-se crescente resposta para EIP e EFP, a partir do nível zero, culminando em valores de EIP, de 35,06%, e de EFP, 0,308%, nos pontos de máximo das equações de regressão, com as respectivas concentrações de cefotaxima de 232,76 e 235,41 mgI-1. Regenerantes foram obtidos pelo cultivo dos calos em meio MS suplementado de 0,001 mg.l-1 de NAA e 1,0 mg.l-1 de BAP. Os ramo regenerados foram alongados pela alternância, a cada 30 dias, entre os meios MS suplementado de 1,0 mg.l-l de zeatina e meio MS na ausência de reguladores de crescimento. O enraizamento dos ramos deu-se pela transferência dos ramos alongados para meio MS suplementado de sacarose a 2% (p/v), metade da concentração dos sais e 1,0 mg.l-1 de AIB. Os ramos permaneceram nesse meio durante 12 dias, quando foram transferidos para a fase final de alongamento das raízes, em meio de composição similar, porém na ausência de reguladores de crescimento. As plantas foram transferidas para casa de vegetação e aclimatizadas com sucesso.

The aim of this work was to evaluate the influence of the antibiotic cefotaxime at both initial (IPE) and final (FPB) plating efficiencies of Passiflora incamata L. mesophyll-derived protoplasts. Newly-expanded leaves of seedlings, obtained prior to the formation of tendrils, were used as a source of mesophyll protoplasts. Protoplasts were plated at a density of 1.5 x 105 protoplasts ml-1 in agarose-solidified droplets of KM8p medium, with several cefotaxime concentrations added to the culture medium: 0; 50; 100;250; 300; and 400 mg-l. The inclusion of cefotaxime to the protoplast culture medium was essential for inducing and sustaining cell division in isolated protoplasts. The analysis of variance showed a significant effect of the antibiotic concentration on IPE and FPB. A quadratic regression model was applied and optimum IPE and PPE values were obtained at cefotaxime concentration of 232.76 and 235.41 mg.l-1, respectively. Protoplast-derived calli were cultured on agar-solidifled MS medium with 0.001 mgl-1 NAA and 1.0 mgl-1 BAP. Regenerated shoots were elongated by subculturing between MS medium with 1.0 mgl-1 zeatin and MS medium lacking growth regulators, and rooted on a half-strenght MS-based medium, supplemented with 1.0 mg.l-1 IBA, for 12 days, followed by the transference to the same medium lacking ' growth regulators. Rooted plants were successfully aclimatized under greenhouse conditions.