Detecção de transgênicos em soja e produtos derivados no Brasil

Abstract

A área global cultivada com transgênicos em 2002 continuou a crescer pelo sexto ano consecutivo, com uma taxa de mais de 10% ao ano, atingindo, em 2002, 58,7 milhões de hectares. No Brasil, o cultivo comercial e o consumo de transgênicos estão suspensos até a presente data, no entanto cultivos clandestinos de soja transgênica têm sido identificados, sobretudo nos estados do sul do país. Inicialmente, este trabalho teve como objetivo oferecer um enfoque sobre a comercialização de soja transgênica e produtos derivados (farelo e ração) no Brasil, com base em amostras enviadas por várias empresas, durante os anos de 2000, 2001 e 2002, ao Laboratório de Análises Genéticas – AgroGenética. Foram analisadas amostras de grãos de soja, farelo e rações à base dessa leguminosa. O método utilizado nas análises foi o da reação em cadeia da DNA polimerase (PCR). “Primers” específicos foram utilizados para detecção do gene RR (“Roundup Ready”), do promotor 35S do vírus do mosaico da couve-flor e da região terminadora NOS do gene da nopalina sintase de Agrobacterium tumefasciens. Como resultados foram identificadas, no ano de 2000, amostras positivas apenas em grãos de soja (77,8%) e farelo (22,2%). Em 2001, 70,8% das amostras positivas foram de grãos de soja, 12,5% de farelo e 16,7% de rações à base de soja. Já, em 2002, 34,9% das amostras positivas foram de grãos de soja, 45% de farelo e 20,1% de ração. Devido à dificuldade em se obter quantidades significativas de DNA em condições de serem analisadas, a partir de alimentos processados, este trabalho teve como segundo objetivo ajustar uma metodologia de extração de DNA para produtos alimentícios processados cárneos para análise quantitativa. Para isso, foram testadas modificações em dois métodos de extração de DNA: o método Wizard (Promega) e o PrepMan Ultra (Applied Biosystems). As modificações no método Wizard incluíram o uso de um volume 1,5 vez maior do tampão de extração que o recomendado pelo fabricante, um maior tempo de incubação (por mais de 12 horas) e a eluição final do DNA em um volume menor de água do que o sugerido. No método do PrepMan Ultra foram testados dois volumes diferentes do reagente de extração, 200 e 400 μL. A reação de PCR em tempo real foi realizada usando-se o sistema ABI Prism SDS 7000 (Applied Biosystems). Os resultados permitiram concluir que a extração de DNA de produtos cárneos utilizando o método Wizard com as modificações propostas, foi mais eficiente que a extração usando o PrepMan Ultra. O presente estudo teve como terceiro objetivo avaliar a real situação do plantio de sementes fiscalizadas e certificadas de soja geneticamente modificada, na safra de 2002/2003, por meio da análise de 2.466 amostras coletadas por laboratórios de análises de sementes dos Estados do Mato Grosso (42%), Rio Grande do Sul (39,5%) e Minas Gerais (10,1%) e pela cooperativa COODETEC, do Estado do Paraná (8,4%). O método empregado nas análises foi o PCR qualitativo, com o uso de “primers específicos”. Detectou-se a presença de soja transgênica apenas nas amostras coletadas no Estado do Rio Grande do Sul (19,69% das amostras analisadas).

The global area cultivated with transgenic plants in 2002 continued to grow for the sixth consecutive year, with a rate of more than 10% a year, reaching in 2002, 58.7 million hectares. In Brazil, the commercial cultivation and consumption of transgenic are suspended to the present date, however, illegal cultivations of transgenic soybean have been identified, mostly in the southern states. Initially, this work had as objective offer a vision of the commercialization of transgenic soybean and derived products (soy flour and soybean based ration) in Brazil based on samples analyzed by the Laboratório de Análises Genéticas – AgroGenética, a private laboratory incubated at the Federal University of Viçosa, sent by several companies during the years of 2000, 2001 and 2002. Samples of soybean grains, soy flours and rations were analyzed. The method used the polymerase chain reaction (PCR). Specific primers were used for the detection of the RR gene ("Roundup Ready"), the promoter 35S of cauliflower mosaic virus and the NOS terminator region of nopaline sintase gene of Agrobacterium tumefasciens. As results it was identified in the year of 2000 positive samples in soybean grains (77.8%) and soy flour (22.2%). In 2001, 70.8% of positive samples were from soybean grains, 12.5% from soy flour and 16.7% from soybean based rations. In 2002, 34.9% of the positive samples were from soybean grains, 45% from soy flour and 20.1% from rations. Due to the difficulty in obtaining significant amounts of DNA in conditions to be analyzed, starting from processed foods, this work had as a second objective to adjust a methodology of DNA extraction for processed meat products containing soybean products for quantitative analysis. Several modifications were tested in two methods of DNA extraction, the Wizard method (Promega) and PrepMan Ultra (Applied Biosystems). The modifications in the Wizard included the use of a bigger volume of the extraction solution (1.5 x recommended by the manufacturer), a larger time of incubation (more than 12 hours) and, the final elution of DNA in a smaller volume of water than recommended. In the PrepMan Ultra method, two different volumes from the extraction reagent, 200 and 400 μL were tested. The real time PCR reaction was accomplished using the ABI Prism SDS 7000 system (Applied Biosystems). The results allowed concluding that the extraction of DNA of meat products using the Wizard method with the proposed modifications was more efficient than the extraction using the PrepMan Ultra. The present study had also as a third objective to evaluate the real situation of the use of fiscalized and certified genetically modified soybean seeds in the agricultural year 2002/2003, through the analysis of 2466 samples collected by laboratories of seed analyses in the states of Mato Grosso (42%), Rio Grande do Sul (39,5%), Minas Gerais (10,1%) and Paraná (8,4%). The method used to analyze the samples was the qualitative PCR using "specific" primers. The presence of transgenic soybean seeds was detected only in samples collected in the state of Rio Grande do Sul (19.69% of the analyzed samples).